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银杏内酯注射液课堂：白果内酯对抗谷氨酸兴奋毒性损伤以保护神经

银杏叶提取物用于抗兴奋毒性神经损害的研究很多，我国银杏资源丰富，白果内酯是从银杏叶中提取得到的萜内酯的有效部位，是传统的银杏叶提取物的重要活性成分，白果内酯能促进神经生长，防止脑、脊髓神经脱髓鞘，国外有研究表明，其神经营养、神经保护作用强于银杏内酯。

卒中、癫痫等急性脑疾病和肌萎缩侧索硬化症、帕金森病等慢性神经退行性疾病都被认为与谷氨酸诱导的兴奋毒性神经损害有关。人们针对这个靶点致力于研制各种神经保护剂，但至今缺少有效干预手段。

本实验利用原代培养海马神经元的谷氨酸兴奋毒性神经损害模型，经预处理给药模式观察了不同剂量白果内酯对神经元损伤的影响，以探讨白果内酯在抗谷氨酸兴奋毒性神经损害中的应用价值。银杏内酯注射液中含有48%白果内酯。

材料与方法

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原代培养新生SD大鼠海马神经元，建立谷氨酸诱导的兴奋毒性模型。采用台盼蓝染色、TUNEL染色凋亡神经元测定及乳酸脱氢酶（LDH）活性测定的方法观察不同剂量白果内酯的神经保护作用，并与谷氨酸N甲基D天门冬氨酸盐（NMDA）受体非竞争性拮抗剂MK801的神经保护作用相比较。

结果

1. 对细胞存活率的影响

药物对细胞形态的影响见图1。对照组神经元折光性强，有明显立体感，突起交织成网；谷氨酸暴露后18 h，接近65%神经元失去正常光晕，胞体变圆，突起断裂，甚至溶解为碎片。经预处理给药模式的白果内酯处理后，细胞均保持了较好的形态，并且呈剂量依赖方式提高了细胞的存活率（图2）。白果内酯在100 μmol/L的剂量下有最佳的保护效果。

图1 海马神经元台盼蓝染色

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图2 白果内酯对神经元细胞存活率的影响

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2.对细胞凋亡率的影响

对照组可观察到少数染色阳性的细胞，经谷氨酸处理后TUNEL阳性细胞增多，凋亡率接近37%，预处理给药白果内酯可明显降低凋亡率（图3）。

图3 白果内酯对海马神经元细胞凋亡率的影响

3. 对LDH泄漏率的影响

谷氨酸作用后LDH泄漏率增加，与对照组相比有显著性差异，白果内酯处理可降低LDH泄漏率（图4）。

图4 白果内酯对海马神经元LDH泄露率的影响

讨论

NMDA受体是谷氨酸受体中研究最早也是最多的受体，在谷氨酸介导的兴奋毒性损伤中起关键性作用，在皮质、海马、纹状体、杏仁核、下丘脑及小脑扁桃体均有广泛分布，以大脑皮质和海马的受体结构密度最高。NMDA受体非竞争性拮抗剂MK801虽可明显对抗谷氨酸的兴奋毒性作用，但大量的实验证明，其易引起低血压、呼吸抑制、记忆损害、拟精神病症状等不良反应，因而限制了其临床应用。随着药物开发“绿色浪潮”时代的到来，来源于天然植物的银杏叶萜内酯越来越受到重视。作为一款分子复方药，银杏内酯注射液兼具拮抗血小板活化因子及保护神经血管单元。

银杏叶提取物用于脑保护的研究很多，其机制研究一直是近年来研究的热点问题。而银杏叶提取物的神经保护作用与银杏的成分密切相关，银杏叶提取物主要包括银杏黄酮及萜类两大类物质，现已证明，银杏萜内酯为银杏叶提取物中主要的药效成分。银杏萜内酯分为二萜类化合物和倍半萜化合物白果内酯，它们都具有2个五元内酯环和1个罕见的舒丁基等结构特征，迄今尚未发现存在于其他任何植物中。二萜类化合物银杏内酯作为公认的血小板活化因子受体拮抗剂，其药理作用已得到充分证实。白果内酯拮抗血小板活化因子作用较弱，但对神经系统有保护作用，可用于治疗脱髓鞘脑、脊髓和神经疾病。国外亦有报道白果内酯对大鼠脑缺血和半球脑缺血有保护作用，还可提高经氰化物处理的原代培养鸡胚神经元的存活性，其机制尚有待于进一步探讨。

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本实验中观察到谷氨酸的兴奋毒性损害同时存在坏死与凋亡，白果内酯能不同程度地对抗谷氨酸兴奋毒性损伤，其预处理给药途径能明显提高海马神经元细胞的存活率，降低凋亡率，减少LDH漏出，并且其保护作用在一定范围内呈剂量依赖的方式，因此将其用于高危人群的预防干预可能有更大价值。

文献来源：

徐静, 孙长凯, 王冬梅,等. 白果内酯对谷氨酸兴奋毒性致神经损害的保护作用[J]. 中草药, 2009, 40(010):.

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